生活饮用水中菌落总数验证报告
1. 检验标准： GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标
2．验证项目：菌落总数
3．合格标准：试验组的菌回收率不得低于70%。（试验组菌数-供试品对照组菌数）÷菌液
组≥ 70%
4．实验材料：
4.1 高压蒸汽灭菌器
4.2 干热灭菌箱
4.3 培养箱36℃±1℃
4.4 电炉
4.5 冰箱
4.6 天平
4.7 pH计或精密pH试纸
4.8 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。
5.菌液制备：
5.1 取大肠埃希氏菌(ATCC 25922)、金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）菌种第 3代～5 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h～24h），分别用 5.0mL 吸管吸取 3.0 mL～5.0mL 稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔，制成混合菌液。随后，用 5.0mL 吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合（振荡）20s，或在手掌上振敲 80 次，以使细菌悬浮均匀。
5.2 初步制成的菌悬液，先用血球计数板测显微计数其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需使用的浓度。
6.培养基和试剂的制备：
6.1 营养琼脂培养基：称取营养琼脂干粉培养基33g，溶于1000mL蒸馏水中，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15min。
6.2 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15min。
7. 饮用水中细菌总数的测定方法验证
验证试验进行 3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次的回收率。
7.1 试验组：取水样1mL和30～300cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注
15～20mL冷却到46℃左右的营养琼脂培养基，旋转平板，将培养基与样液充分混合，待培养基凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃的培养箱中培养48h，并做平行样。
7.2. 菌液组：取1ml菌液浓度为30～300cfu/mL试验菌测定所加的试验菌数，做平行样。
7.3. 供试品对照组：取水样1mL，按菌落总数平板计数方法测定供试品本底菌数。
7.4. 结果见表
试验组细菌平板计数（回收率%）
7.5．结论：在3次独立的平行试验中，采用培养基稀释法，回收率均大于 70% ，本次验证共进行三次，在相同的检验条件下，检验结果均符合规定。
8．是否对方法偏离？
否
9．结论：
生活饮用水中菌落总数的检测符合标准《GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标》的要求
2．验证项目：菌落总数
3．合格标准：试验组的菌回收率不得低于70%。（试验组菌数-供试品对照组菌数）÷菌液
组≥ 70%
4．实验材料：
4.1 高压蒸汽灭菌器
4.2 干热灭菌箱
4.3 培养箱36℃±1℃
4.4 电炉
4.5 冰箱
4.6 天平
4.7 pH计或精密pH试纸
4.8 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。
5.菌液制备：
5.1 取大肠埃希氏菌(ATCC 25922)、金黄色葡萄球菌（ATCC 25923）菌种第 3代～5 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h～24h），分别用 5.0mL 吸管吸取 3.0 mL～5.0mL 稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔，制成混合菌液。随后，用 5.0mL 吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合（振荡）20s，或在手掌上振敲 80 次，以使细菌悬浮均匀。
5.2 初步制成的菌悬液，先用血球计数板测显微计数其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需使用的浓度。
6.培养基和试剂的制备：
6.1 营养琼脂培养基：称取营养琼脂干粉培养基33g，溶于1000mL蒸馏水中，加热溶解，分装，121℃高压灭菌15min。
6.2 无菌生理盐水：称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15min。
7. 饮用水中细菌总数的测定方法验证
验证试验进行 3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次的回收率。
7.1 试验组：取水样1mL和30～300cfu试验菌，分别注入平皿中，立即倾注
15～20mL冷却到46℃左右的营养琼脂培养基，旋转平板，将培养基与样液充分混合，待培养基凝固后，翻转平皿，置36℃±1℃的培养箱中培养48h，并做平行样。
7.2. 菌液组：取1ml菌液浓度为30～300cfu/mL试验菌测定所加的试验菌数，做平行样。
7.3. 供试品对照组：取水样1mL，按菌落总数平板计数方法测定供试品本底菌数。
7.4. 结果见表
试验组细菌平板计数（回收率%）
| 验证菌株 | 平皿号 | 供试品对照组cfu/mL | 菌液组cfu/mL | 试验组cfu/mL | 回收率% | |
| 独立试验一 | 大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌（36℃±1℃培养48h计数） | 1 | 30 | 260 | 270 | 91.9 |
| 2 | 35 | 260 | 280 | |||
| 独立试验二 | 大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌（36℃±1℃培养48h计数） | 1 | 20 | 280 | 270 | 88.9 |
| 2 | 25 | 286 | 278 | |||
| 独立试验三 | 大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌（36℃±1℃培养48h计数） | 1 | 28 | 250 | 260 | 94.0 |
| 2 | 30 | 265 | 282 |
7.5．结论：在3次独立的平行试验中，采用培养基稀释法，回收率均大于 70% ，本次验证共进行三次，在相同的检验条件下，检验结果均符合规定。
8．是否对方法偏离？
否
9．结论：
生活饮用水中菌落总数的检测符合标准《GB/T 5750.12-2006 生活饮用水标准检验方法 微生物指标》的要求
