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微生物实验室常用染色液配制方法

       ⒑ 间苯三酚(phloroglucin)溶液 用于测定木质素。

  配方:间苯三酚5g ; 95%酒精100ml

  注:此溶液呈黄褐色即失效。

  ⒒ 橘红G(orange G)酒精溶液 为酸性染料,染细胞质,常作二重或三重染色用。

  配方:橘红G 1g ; 95%酒精100ml

  ⒓ 番红(safranin O) 为碱性染料,适用于染木化、角化、栓化的细胞壁,对细胞核中染色质、染色体和花粉外壁等都可染成鲜艳的红色。并能与固绿、苯胺兰等作双重染色,与橘红G、结晶紫作三重染色。

  配方:(1)番红水溶液 番红0.1或1 g ;蒸馏水100ml

  (2)番红酒精溶液 番红0.5或1 g ;50%(或95%)酒精100ml

  (3)苯胺番红酒精染色液

  甲液 番红5 g +95%酒精50ml

  乙液 苯胺油20ml +蒸馏水450ml

  将甲、乙二溶液混合后充分摇均匀,过滤后使用。

  ⒔ 固绿(fast green) 又称快绿溶液。为酸性染料,能将细胞质,纤维素细胞壁染成鲜艳绿色,着色很快,故要很好的掌握着色时间。

  配方:(1)固绿酒精液 固绿0.1 g ; 95%酒精100ml

  (2)苯胺固绿酒精液 固绿 1 g ;无水酒精 100ml ;苯胺油 4ml

  配后充分摇匀,过滤后使用。现配现用效果好。

  ⒕ 苏木精(hematoxylin)染液 苏木精是植物组织制片中应用最广的染料,是苏木科植物苏木的心材提取出来的。它是很强的细胞核染料,而且可以分化出不同颜色。配方很多,现举海登汉氏(Heidenhain's)苏木精染色液,又称铁矾苏木精染色液。

  配方:甲液(媒染剂): 硫酸铁铵(铁明矾)2-4g ;蒸馏水100ml

  (必须保持新鲜,最好临用之前配制)

  乙液(染色剂):苏木精 0.5-1g ;95%酒精 10ml;蒸馏水 90ml

  配制步骤:(1)将苏木精溶于酒精中,瓶口用双层纱布包扎,使其充分氧化(通常在室内放置两个月后方可使用)。(2)加入蒸馏水,塞紧瓶口,置冰箱中可长期保存。

  切片需先经甲液媒染,并充分水洗后才能以乙液染色,染色后经水稍洗再用另一瓶甲液分色至适度。

  铁矾苏木精染液为细胞学上染细胞核内染色质最好的染色剂,但要注意甲液与乙液在任何情况下决不能混合。

  ⒖亚甲基蓝染液 常用于细菌、活体细胞等的染色。

  取0.1g亚甲基蓝,溶于100ml蒸馏水中即成。

  ⒗詹纳斯绿B(Janus green B)染液

  将5.18gJanus 绿溶于100ml蒸馏水,配成饱和水溶液。用时需稀释。稀释的倍数应视材料不同而异。

  ⒘硫堇染液

  取0.25克硫堇(也称劳氏青莲或劳氏紫)粉末,溶于100ml蒸馏水中,即可使用。使用此液时,需要用微碱性自来水封片或用1%NaHCO3水溶液封片,能成多色反应。

  18.黑色素液

  水溶性黑素10g,蒸馏水100mL,甲醛(福尔马林)0.5mL。可用作荚膜的背景染色。

  19.墨汁染色液 国产绘图墨汁40mL,甘油2mL,液体石炭酸2mL。先将墨汁用多层纱布过滤,加甘油混匀后,水浴加热,再加石炭酸搅匀,冷却后备用。用作荚膜的背景染色。

  20.吕氏(Loeffier)美蓝染色液

  A液:美蓝(methylene blue,又名甲烯蓝)0.3g,95%乙醇30mL;

  B液:0.01%KOH100mL。

  混合A液和B液即成,用于细菌单染色,可长期保存。根据需要可配制成稀释美蓝液,按1∶10或1∶100稀释均可。

  21.革兰氏染色液

  (1)结晶紫(cristal violet)液:结晶紫乙醇饱和液(结晶紫2g溶于20mL95%乙醇中)20mL,1%草酸铵水溶液80mL。将两液混匀置24h后过滤即成。此液不易保存,如有沉淀出现,需重新配制。

  (2)芦戈(Lugol)氏碘液:碘1g,KI 2g,蒸馏水300mL。先将KI溶于少量蒸馏水中,然后加入碘使之完全溶解,再加蒸馏水至300mL,即成。配成后贮于棕色瓶内备用,如变为浅黄色 能使用。

  (3)95%乙醇:用于脱色,脱色后可选用以下(4)或(5)的其中一项复染即可。

  (4)稀释石炭酸复红溶液:碱性复红乙醇饱液(碱性复红1g,95%乙醇10mL,5%石炭酸90mL)10mL,加蒸馏水90mL。

  (5)番红溶液:番红O(safranine O,又称沙黄O)2.5g,95%乙醇100mL,溶解后可贮存于密闭的棕色瓶中,用时取20mL与80mL蒸馏水混匀即可。

  以上染色液配合使用,可区分出革兰氏染色阳性(G+ )或阴性(G- )细菌,前者蓝紫色,后者淡红色。

  22.齐氏(Ziehl)石炭酸复红液:碱性复红0.3g溶于95%乙醇10mL中为A液;0.01%KOH溶液100mL为B液。混合A、B液即成。

  23.姬姆萨(Giemsa)染液

  (1)贮存液:称取姬姆萨粉0.5g,甘油33mL,甲醇33mL。先将姬姆萨粉研细,再逐滴加入甘油,继续研磨,最后加入甲醇,在56℃放置1-24h后即可使用。

  (2)应用液(临用时配制):取1mL贮存液加19mLpH7.4磷酸缓冲液即成。也可以贮存液∶甲醇=1∶4的比例配制成染色液。

  24. 1%瑞氏(Wright's)染色液

  称取瑞氏染色粉6g,放研钵内磨细,不断滴加甲醇(共600mL)并继续研磨使溶解。经过滤后染液须贮存一年以上才可使用,保存时间愈久,则染色色泽愈佳。

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