菌种活化的操作方法
菌种活化的操作方法涉及多个步骤，这些步骤旨在恢复菌种的活性并恢复其优良的生产性能。以下是一个详细的操作指南：
一、准备阶段
了解菌种特性：在活化菌种之前，首先需要了解菌种的生长特性，包括其营养需求、生长温度、气体环境、渗透压、酸碱度及嗜盐性等条件。这有助于选择合适的培养基和培养环境。
配置培养基：根据菌种的生长特性，配置适宜的培养基。培养基的成分通常包括基本营养成分（如蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉等）、氯化钠（维持渗透压）、磷酸盐（维持pH稳定）以及可能的特殊成分（如血清、半胱氨酸、氯化血红素等）。
准备设备和材料：包括无菌操作台、接种环、吸管、培养基、菌种管（或冻存管）等。确保所有设备和材料都已灭菌处理。
二、菌种复苏
菌种复苏的方法取决于其保存方式，常见的保存方式包括定期移植法、液体石蜡法、沙土管法、真空冷冻干燥法、-80℃冰箱冻结法以及液氮超低温冻结法等。以下是一些常见保存方式的复苏方法：
定期移植法：直接将菌种转接至新鲜培养基上即可。
液体石蜡法：挑取少量菌体转接在适宜的新鲜培养基上，生长繁殖后再重新转接一次。
沙土管法：在无菌条件下打开沙土管，取部分沙土粒于适宜的斜面培养基上，长出菌落后再转接一次。或取沙土粒于适宜的液体培养基中增殖培养后再转接斜面。
真空冷冻干燥法：先用75%酒精棉花擦拭安瓿上部，将安瓿管顶部烧热后敲开，用无菌水或培养液溶解菌块，然后移入新鲜培养基上进行适温培养。
-80℃冰箱冻结法及液氮超低温冻结法：从冰箱或液氮罐中取出菌种管后，应立即放置在38℃-40℃水浴中快速复苏并适当摇动，直到内部结冰全部溶解为止。然后将内容物移至适宜的培养基上进行培养。
三、活化培养
接种：在无菌操作下，使用接种环或吸管将复苏后的菌种接种到新鲜培养基上。接种方式可以是划线法或涂布法。
培养：将接种好的培养基置于指定温度的培养箱中培养。根据菌种的不同，培养时间可能有所差异。
观察与挑选：在培养过程中定期观察菌种的生长情况。当菌落生长茁壮时，挑选其中部分菌落接种到新的培养基中继续培养。重复此步骤2-3次，以得到生长良好的菌落。
四、保存与记录
保存：将活化后的菌种按照适当的保存方式进行保存，如定期移植、冷冻干燥、液氮超低温保存等。
记录：详细记录菌种的活化过程、培养基成分、培养条件、生长情况等信息，以便后续使用和追溯。
五、注意事项
无菌操作：整个活化过程中必须严格遵守无菌操作规范，以防止杂菌污染。
安全防护：使用液氮等低温物质时需注意安全防护措施，避免冻伤等意外发生。
设备维护：定期对设备进行维护和保养，确保其正常运行和延长使用寿命。
通过以上步骤和注意事项的遵循，可以成功完成菌种的活化操作，为后续的科研或生产工作提供优质的菌种资源。
