关于生物实验当中的标准曲线常见问题解答
在生物实验中，标准曲线是数据分析的重要依据，以下是对标准曲线常见问题的解答：
一、标准曲线的制作依据
标准曲线的制作主要依据GB/T 22554-2010《基于标准样品的线性校准》，其具体要求包括：
标准曲线的浓度范围应覆盖正常操作条件下的被测量范围。
标准样品的组分尽量与被测样品组分一致。
标准样品的浓度值应等距离的分布在被测量范围。
标准样品的个数至少应有3个浓度。
每个标准点至少重复2次，这个重复是指从稀释开始。如果国家标准有相应的浓度系列推荐，尽量按国家标准执行。
二、标准曲线的点数
对于一些低浓度，特别是微量分析，并且浓度范围不是很大的，检测器响应可靠，背景干扰非常小的，可以选用较少的工作点，一般有3个浓度点就足够了，有些甚至可以只用一个浓度点（另一个点直接用坐标原点）。
对于平时测量的样品浓度范围较宽，并且检测器响应不完全是一次曲线（直线）的，可以采用二次曲线或分段校正方式，以减少数据偏差。这种情况就需要多用几个数据点，如果不分段，数据点有4~6个就够用。
实验室应按检测标准（方法）的要求使用标准溶液或标准物质建立标准曲线。所用标准溶液或标准物质应覆盖被测样品的浓度范围。检测标准（方法）如无具体的要求，至少使用5个标样（除空白外）建立线性标准曲线，每个点重复测定1~3次。对于筛选方法，线性回归方程的相关系数不应低于0.98；对于确证方法，相关系数不应低于0.99。实际上，大于0.99是判断是否为线性相关的一个标准，但在实际应用中，线性大于0.999才是比较理想的。
三、标准曲线的有效期与校正
标准曲线属于实验室质量控制的范围，按照《实验室资质认定评审准则》中结果控制的要求，应定期使用有证标准物质（参考物质）进行监控，或使用次级标准物质（参考物质）开展内部质量控制。然而，准则中并未对“定期”进行具体规定，因此具体的定期时间应根据实验室的实际情况来定。
原则上，标准曲线应每天进行校正，但每次不一定需要重新制作整条标准曲线。因为每次实验的流动相和仪器状态都可能有所不同，所以不同批次间的保留时间可能不一致。因此，每次实验时必须进标准品样品进行定位与定量。标准曲线不能长期使用，但可以短期使用。使用前可以做一个单点重校，测试一个零点和中间点，以测出一个纠正过的曲线。
四、标准曲线的其他注意事项
在制作标准曲线时，应保证标准品的纯度，所用标准品最好是新打开的、纯度较高的固体或溶液，以防止污染。同时，容器要保证洁净，移取液体体积要精确、迅速，尽可能使用同一根移液管，以减少人为误差。
在检测标准样品时，应按浓度递增顺序进行，以减少高浓度对低浓度的影响，提高准确性。
如果做出的标准曲线弯曲或线性不够好，可能是由于多种原因造成的，如仪器未校验好、移取液体体积不准确、标准品纯度不够高、容器不洁净等。此时，应仔细检查实验过程，找出问题所在并进行纠正。
综上所述，制作和使用标准曲线时应严格遵循相关规定和要求，确保实验结果的准确性和可靠性。
