“发光分析法”是化学检验员在微量、痕量物质检测中常用的一类高灵敏度光学分析技术。它基于物质在特定条件下发射光的现象，通过测量发光强度实现定性或定量分析。在实际工作中，化学检验员主要接触的是分子发光中的荧光分析法和化学发光分析法，两者均具有灵敏度高、选择性好、线性范围宽等优点。

一、荧光分析法（Fluorescence Spectroscopy）

1. 基本原理

某些物质在吸收紫外或可见光后，电子跃迁至激发态，随后以辐射形式释放能量返回基态，发出波长较长的光，这一现象称为荧光。荧光强度与物质浓度在一定范围内成正比，可用于定量分析。

激发光谱：固定发射波长，扫描激发波长，确定最佳激发条件。

发射光谱：固定激发波长，扫描发射波长，获得特征荧光峰。

2. 仪器组成（荧光分光光度计）

光源：氙灯（提供连续紫外-可见光）；

激发单色器：选择特定激发波长；

样品室：四面透光的石英比色皿；

发射单色器：分离发射光；

检测器：光电倍增管（PMT），置于与入射光垂直方向（90°角），以减少背景干扰。

3. 定量方法

标准曲线法：配制系列标准溶液，测定荧光强度，绘制浓度–强度曲线；

标准加入法：用于复杂基体样品。

4. 应用场景（化学检验员常用）

多环芳烃检测：如苯并[a]芘（强致癌物），经萃取后测定荧光；

维生素测定：如维生素B2（核黄素）、维生素A；

药物分析：奎宁、阿米卡星等荧光药物的含量测定；

环境监测：水中石油类物质、酚类化合物的检测。

5. 影响因素与注意事项

荧光猝灭：重金属离子、溶解氧等可降低荧光强度；

溶剂效应：溶剂极性影响荧光峰位置；

pH影响：影响分子结构，进而影响荧光；

瑞利散射和拉曼散射：可能干扰测定，需注意区分。

二、化学发光分析法（Chemiluminescence Analysis）

1. 基本原理

化学发光是某些化学反应过程中释放的能量直接激发产物分子，使其处于激发态，当其返回基态时发射光。该过程无需外部光源激发，因此背景信号极低，灵敏度极高（可达ppt级）。

常见体系：

鲁米诺（Luminol）体系：在碱性条件下，被过氧化氢、铁、铜、辣根过氧化物酶等催化，发出蓝光（λ≈425 nm），常用于检测H₂O₂、血迹、金属离子。

过氧草酸酯体系：用于检测H₂O₂、草酸等。

生物发光：如荧光素酶催化荧光素氧化发光，用于生物检测。

2. 仪器组成

反应系统：将试剂与样品混合（流动注射、微流控等）；

光检测器：光电倍增管或CCD，在暗室中检测发光信号；

数据处理系统：记录发光强度随时间的变化（发光动力学曲线）。

3. 定量依据

化学发光强度（或总发光量）与待测物浓度在一定范围内呈线性关系。

4. 应用场景

环境分析：水中H₂O₂、NOx、SO₂的检测；

食品安全：抗生素残留、非法添加物的间接测定；

临床检验：免疫分析（化学发光免疫分析，CLIA），用于激素、肿瘤标志物检测；

水质监测：基于发光细菌的生物毒性测试（如费氏弧菌）。

5. 优势与特点

无需光源：仪器结构简单，背景噪声低；

灵敏度极高：比荧光法高2–3个数量级；

线性范围宽；

适合自动化和在线检测。

三、荧光与化学发光对比

四、操作要点（化学检验员注意事项）

荧光分析：

使用石英比色皿，避免玻璃吸收紫外光；

样品避免长时间光照，防止光漂白；

控制温度和pH，保持条件一致。

化学发光：

保证反应混合均匀，控制流速和反应时间；

系统需避光，防止外界光干扰；

试剂新鲜配制，避免发光效率下降。

五、总结

发光分析法是化学检验员进行高灵敏度检测的重要工具。

荧光法适用于具有天然荧光或可衍生为荧光物质的分析，操作成熟，应用广泛；

化学发光法则以其超高灵敏度和低背景优势，在痕量分析、免疫检测和生物传感中发挥关键作用。

化学检验员应掌握两类方法的基本原理、仪器操作和数据处理技能，结合实际样品选择合适方法，并注意控制干扰因素，确保分析结果准确可靠。随着新型发光材料（如量子点、上转换纳米材料）和自动化技术的发展，发光分析法在未来的应用将更加广泛和深入。