一、化学检验员微生物检验概述

微生物检验是化学检验员在食品、水质、药品、化妆品等领域必须掌握的重要技能。其目的是检测样品中微生物的种类、数量和活性，判断样品是否符合卫生标准。

二、化学检验员培养基的制备

1. 培养基的分类

化学检验员常用基础培养基：营养琼脂、营养肉汤（用于菌落总数测定）

化学检验员常用选择性培养基：伊红美蓝琼脂（EMB，用于大肠菌群分离）、麦康凯琼脂（用于肠道菌分离）、SS琼脂（用于沙门氏菌分离）

化学检验员常用鉴别培养基：三糖铁琼脂（TSI，用于肠道菌鉴别）

2. 制备要点

化学检验员按说明书称量培养基干粉，加入蒸馏水溶解

调节pH至规定值（通常7.2～7.4）

高压灭菌（121℃，15～20分钟）

化学检验员灭菌后冷却至45～50℃时倾注平板，避免产生气泡

倾注后的平板需倒置存放于4℃冰箱中，有效期一般为7天

三、化学检验员菌落总数测定

1. 基本原理

化学检验员将样品经适当稀释后，取一定量接种于营养琼脂平板上，在37℃培养48小时后计数菌落数

结果以CFU/g（或CFU/mL）表示

2. 操作步骤

化学检验员称取25g（或25mL）样品，加入225mL无菌生理盐水，制成1:10稀释液

化学检验员进行10倍系列稀释（10⁻¹、10⁻²、10⁻³……）

化学检验员选取2～3个适宜稀释度，各取1mL接种于无菌平皿中

化学检验员倾注约15mL已融化并冷却至45℃的营养琼脂，轻轻旋转混匀

化学检验员待琼脂凝固后倒置放入37℃恒温培养箱中培养48小时

化学检验员计数菌落数，选取菌落数在30～300之间的平板进行计算

3. 结果报告

化学检验员取两个平行平板的平均值

结果保留两位有效数字，用科学计数法表示

四、化学检验员大肠菌群测定

1. 多管发酵法

化学检验员将样品稀释液接种于乳糖胆盐发酵管中

37℃培养24小时，观察产酸产气情况

产酸产气者为阳性，需进一步做证实试验

化学检验员根据阳性管数查MPN表得出结果

2. 平板计数法

化学检验员使用VRBA（结晶紫中性红胆盐琼脂）平板

37℃培养24小时后计数典型菌落（紫红色、有胆盐沉淀环）

典型菌落需做证实试验

五、化学检验员无菌操作要求

化学检验员所有操作必须在超净工作台或生物安全柜中进行

化学检验员操作前需对手部消毒，穿戴无菌手套、口罩和实验服

化学检验员使用的器具必须经过高压灭菌

化学检验员操作过程中禁止说话、咳嗽，避免交叉污染

化学检验员废弃物需经高压灭菌后方可处理